甲基化檢測BSP/MSP法
服務(wù)簡介：
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容之一，它可以抑制基因的表達(dá)。甲基化通常發(fā)生在胞嘧啶的C5位，形成5-甲基胞嘧啶（5mC），甲基化的胞嘧啶多位于CpG島上。DNA甲基化在人的正常發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾?。ㄈ绨l(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調(diào)等）過程中發(fā)揮重要作用，已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的重要研究內(nèi)容。該方法為甲基化檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，可定量檢測基因甲基化水平。基因組DNA經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，設(shè)計BSP引物擴(kuò)增目的片段，zui后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆并選取10個轉(zhuǎn)化子序 列，即可確定所研究的CpG區(qū)域的甲基化頻率。目前，基因的甲基化研究主要結(jié)合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術(shù)，分為甲基化特異性PCR（Methylationspecific PCR,MSP）和硫化測序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。
服務(wù)原理：
BSP：甲基化的胞嘧啶在亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基后不會轉(zhuǎn)變，用一對特異性引物擴(kuò)增后測序，再與DNA原始序列比對確定甲基化位點。測序法克服了只能針對單個位點檢測，并且這些位點必須是限制性內(nèi)切酶識別位點的缺點，可以對任何基因序列的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測。
MSP: 原理是基于DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后，所有未甲基化的胞嘧啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏ぃ谆陌奏t不變。基于這種堿基的改變，然后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增，zui后通過瓊脂糖凝膠電泳分析，確定與引物互補(bǔ)的DNA序列的甲基化狀態(tài)。這種方法適于研究中大量樣本的DN***段，具有方便快捷，靈敏度高的優(yōu)點，是目前較為常用的甲基化檢測方法。
服務(wù)流程：
1、根據(jù)目的基因啟動子序列設(shè)計相應(yīng)的引物；
基因組DNA的提取和定量；
亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA
修飾后DNA純化回收；
a.結(jié)合實時定量PCR的qMSP
b.BSP，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序并與未經(jīng)處理的序列比較；
6、數(shù)據(jù)處理
向客戶提供數(shù)據(jù)分析結(jié)果與實驗報告。
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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